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技術(shù)文章

WB 化學(xué)發(fā)光成像儀操作步驟指南

WB 化學(xué)發(fā)光成像儀是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)里的得力助手,熟練掌握其操作步驟,能讓實(shí)驗(yàn)事半功倍。下面就為大家梳理WB 化學(xué)發(fā)光成像儀關(guān)鍵操作步驟流程:

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
儀器預(yù)熱:接通電源,打開化學(xué)發(fā)光成像儀開關(guān),讓儀器預(yù)熱 15 - 30 分鐘。如同運(yùn)動員上場前的熱身,預(yù)熱能使儀器達(dá)到穩(wěn)定工作狀態(tài),保障檢測精度。
檢查環(huán)境:確保操作環(huán)境清潔、干燥,室溫維持在適宜范圍,通常是 20 - 25℃ 。過濕、過熱或過冷的環(huán)境,都可能干擾儀器性能,影響成像效果。
準(zhǔn)備樣本:提前完成蛋白質(zhì)印跡(WB)實(shí)驗(yàn),將含有目的蛋白的 PVDF 膜或 NC 膜,用鑷子小心取出,去除多余的緩沖液,保證膜表面潔凈,避免雜質(zhì)干擾后續(xù)成像。

樣本放置與參數(shù)設(shè)置
放置膜:打開成像儀暗箱,將處理好的膜平整放置于成像平臺中央,注意避免膜出現(xiàn)褶皺,不然會致使成像不均。輕輕合上暗箱,確保密封嚴(yán)實(shí),防止外界光線進(jìn)入。
參數(shù)設(shè)定:打開操作軟件,依據(jù)實(shí)驗(yàn)需求與所使用的發(fā)光底物特性,調(diào)整曝光時間、靈敏度等關(guān)鍵參數(shù)。初次操作時,若拿捏不準(zhǔn),可先嘗試較短曝光時間,后續(xù)按需增加,以防過度曝光讓圖像丟失細(xì)節(jié)。靈敏度設(shè)置要適配目標(biāo)蛋白的預(yù)估含量,含量低就調(diào)高些,反之亦然。

圖像采集與分析
采集圖像:點(diǎn)擊軟件中的 “開始采集” 按鈕,成像儀即刻捕捉膜上的化學(xué)發(fā)光信號,并轉(zhuǎn)化成數(shù)字圖像顯示于屏幕。采集過程保持安靜,勿晃動儀器,不然成像易模糊。
圖像優(yōu)化:倘若初次采集的圖像不夠理想,例如背景過亮、蛋白條帶不清晰,利用軟件自帶的對比度、亮度調(diào)節(jié)工具微調(diào),凸顯目標(biāo)條帶。
分析數(shù)據(jù):運(yùn)用軟件的定量分析功能,框選目標(biāo)蛋白條帶,測量其灰度值、面積等數(shù)據(jù),以此來對比不同樣本間蛋白表達(dá)量的差異,為實(shí)驗(yàn)結(jié)論筑牢數(shù)據(jù)根基。

實(shí)驗(yàn)收尾
關(guān)閉軟件:完成圖像采集與分析,先安全關(guān)閉操作軟件,避免數(shù)據(jù)丟失或軟件出錯。
關(guān)閉儀器:關(guān)掉成像儀電源開關(guān),拔下插頭。清理暗箱,擦拭平臺,為下次實(shí)驗(yàn)營造良好開端。

只要遵循上述步驟,就能順利駕馭 WB 化學(xué)發(fā)光成像儀,助力科研探索。
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